EN

新闻检索

《新冠病毒核酸筛查稀释混样检测技术指引》解读,这“四个点”拍了拍你

2020-07-28 09:40


核酸混检是指将多个样本进行混合后提取核酸进行扩增检测的方法。为规范应用混检技术进行新冠病毒筛查,7月21日国务院应对新型冠状病毒肺炎疫情联防联控机制医疗救治组印发了《新冠病毒核酸筛查稀释混样检测技术指引》,对我国新冠疫情常态化防控管理中的核酸混检提出了指导。下面,请随小编一起来了解学习该政策。



适用人群


指引明确提出新型冠状病毒核酸筛查稀释混样技术仅适用于大人群样本的筛查,稀释混样检测结果不作为最终确诊依据,在人群总体阳性率较低(低于0.1%)时更为适宜。


不适用于:

1.重点区域人群(近期有疫情发生的小区含确诊病例和无症状感染者、老旧小区、人口密集小区、流动人口聚集区和近期离省外出人群)、其他不适合稀释混样检测的人群;


2.医疗机构就诊患者。


以上表明,核酸混检有其特定的适用场景,即在广泛人群筛查时可以起到经济高效的快速初步筛选作用,为后面缩小目标范围锁定阳性样本,节约试剂和检测时间。而在新冠感染风险相对较高的重点区域和人群则不宜采取混检策略,应单独分检,以防漏诊。


操作流程


在操作流程方面,目前指引注意事项中提到稀释混样检测必须提取核酸,原因在于核酸混检方法的采样对核酸浓度具有较大影响,指引方案中指出采样时将拭子头浸入含1~3ml病毒保存液中,再将采集的数个样本(原则上不超过5个)各取200ul进行充分混合,形成混合待检样本。核酸提取与检测过程按有关实验室常规标准操作流程进行。每一次上样扩增中,80个加样孔用于加入混合样本(如5混1,总计80×5个单样本);10个加样孔用于单样本(单样本来自上述80×5个原液的随机样本)。


如果常规磁珠法核酸提取试剂盒取200ul样本进行核酸提取,无法避免降低样本浓度,5样本混合后,样本浓度将稀释5倍。当混样检测,出现低浓度(弱阳性)样本(1000copies/ml)时,5个样本混合,该样本浓度稀释5倍则变成200copies/ml。


选择高灵敏度的核酸检测试剂是确保筛查结果准确性的重要条件。当前获批的大部分核酸检测试剂盒灵敏度低于200copies/ml,若采用常规磁珠法核酸提取试剂取200ul样本提取核酸检测,则遇到弱阳性样本(浓度低于1000copies/ml)混样检测时,大部分厂家试剂无法检出,容易造成漏检。


圣湘生物的核酸提取试剂有磁珠法和快速核酸释放剂法两种,灵敏度都达到200copies/ml,完全可以满足检测灵敏度要求,目前新研发的磁珠法核酸提取试剂可将灵敏度提升到10copies/ml。根据国家卫健委临检中心室间质评EQA报告,在2020年第一次室间质评活动中202010号样本(128copies/ml)全国仅有6家实验室检出,测评用到的新冠核酸检测试剂品牌,圣湘生物就是其中之一。


市场主流企业新冠核酸检测试剂(荧光PCR法)性能参数对比


核酸提取方法


核酸提取目前主要采用的方法有磁珠法和快速核酸释放剂法,二者均在临床广泛应用。


1、磁珠法


磁珠法提取核酸是通过对磁珠进行包被(如硅基、氨基、羧基等),从而实现对核酸的高通量、自动化提取。其原理是核酸与磁珠主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用结合,细胞或组织在裂解液作用下释放其中的核酸,此时经过表面修饰的纳米磁珠即与核酸进行特异性结合,形成“核酸-磁珠复合物”。然后在外加磁场的作用下将复合物分离,最后经过洗脱非特异性吸附的杂质、去盐、纯化后,得到欲提取的核酸。



圣湘生物使用的进口纳米级磁珠表比面积大,吸附核酸多,磁响应性和稳定性极好;配备的侧吸式的磁力架磁场强度高,吸附高效;专利磁珠修饰技术,能够增强核酸捕获。创新的裂解配方,裂解能力强,无蛋白酶K,无需加热,降低了气溶胶污染风险。自主专利的无机溶液与有机溶液组合洗涤方式,去杂质能力强,一次洗涤,核酸损失少,操作简便。使用内源性内标监控采样、提取和扩增全过程,避免了假阴性。


2、快速核酸释放剂法


快速核酸释放剂法,使用化学释放剂或裂解液直接裂解样本释放核酸,不需纯化,比磁珠法具有更加快速简便的优势,整个操作在一个反应管进行,减少操作误差,提高检验结果可重复性。独特的干扰物螯合封闭机制,分离杂质,纯化核酸,避免干扰。核酸免提取可减少物理因素对核酸的降解,保证核酸结构的完整性,核酸无洗涤和损失,提高检验结果的灵敏度。


该方法操作简便,不仅可以应用于临床疑似患者的确诊,也可用于疫情反弹地区多个样本混合采集后的检测,结合快速核酸检测系统,能拓展更多应用场景,有效提高检测效率,减轻工作人员实验手工操作压力,是磁珠法的有力补充手段。圣湘生物的快速核酸释放剂法具有自主专利配方,检测灵敏度性能超过普通国产同类产品,完全能够满足临床单检和混采检测灵敏度要求。


圣湘生物可提供多种新冠病毒核酸检测解决方案,基于快速核酸释放技术和磁珠法技术均可实现不同通量的自动化操作,满足不同场景、不同人群筛查就诊的需求。如大规模人群筛查时,可以将多个标本混采在一管后,采用原始样本上机的方式,避免因稀释样本降低灵敏度而造成的漏检;医疗机构就诊患者、高危区域人群,需要进行快速确诊分流时,两种样本核酸提取技术都可完美实现不同通量的自动化操作!


质量控制


在质量控制方面,指引对室内质控和室间质评提出了要求。如每批上样检测应当在剩余加样孔中设置1个弱阳性质控样本和三个阴性质控样本(2份生理盐水和1份阴性混合样本)。实验室应参加省级及以上临床检验中心组织的室间质量评价(EQA)活动,按照活动要求完成质评物接收、储存、检测和回报检测结果等工作。指引注意事项中也建议对试剂检测灵敏度进行评估,应选择灵敏度较高的检测试剂。


为达到指引的质控要求,建议对目前市场上的各类核酸提取试剂进行混检模式下的横向测评,了解不同检测试剂的灵敏度限值,以便在混检策略时采用适宜的核酸提取试剂,发挥混检在大规模筛查中的作用,为早期阻断疫情传播提供有力支撑。


狠狠色丁香婷婷综合/陈歌马晓楠在线阅读/与妈妈在一起在线观看/亚洲理论在线a中文字幕